乙

肝

表面

抗

原的

ELISA

法

定

量分析

方

法

學驗

證

姓名

Z 

P

學號

0925400072

班級

09

級醫學檢驗本科二班

指導老師

沈

富

兵

二〇

一

三

年四

月

乙

肝

表面

抗

原定量測定的方法學驗證

作者：

ZP

（成都

醫學院檢驗醫學院

09

級醫學檢驗本科二班，

610500

）

【摘要

】

目的

用福州藍圖生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原

ELISA

法定量分析試劑盒對乙肝表面

抗原定量測定的方法進行驗證，以判斷是否能用于教學以及臨床分析。

方

法

運用

ELLISA

法定量測定乙

肝表面抗原，應用試劑盒

HBsAg

標準從濃度為

8ng/ml 

的

2 

倍稀釋的

6

個濃度梯度，根據

OD

值繪制標準

曲線再計算相對回收率和板內和板間精密度，通過資料數據綜合分析。

結

果

HBsAg 

線性較好，其準確

度、精密度、

LOD

值均在正常范內。

結論

ELISA

法定量檢測

HBsAg

能較準確、快速地反映體內乙肝病

毒復制情況，可以用于教學以及臨床分析。

【關鍵

詞】

乙肝表面抗原

方法學驗證

標準曲線

精密度

ELLISA

病毒性肝炎中乙型肝炎的危害較大，我國是病毒性乙型肝炎的高發流行區，

普通人群的乙型肝炎病毒

(hepatitis 

B 

virus

，

HBV)

感染率接近

60

％，約占世

界

HBV

攜帶者的

1/3

。乙型肝炎病毒的病原體不僅具有傳染性，還可能導致發

展

成

肝硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、準確、定量檢測對乙型肝

炎

臨床

診斷、療效觀察及預防具有重要的意義。酶免分析法

HBV

—

EIA

是

HBV

抗原和

抗體

最常用的檢測技術，其方法簡便、價廉，適合一般實驗室推廣，其中酶

聯

免疫吸

附技術

(

enzyme

linked 

immunosorbent

assay, 

ELISA)

目前應用最為廣

泛，它

常用聚苯乙烯為固相載體，使其與待測標本中的相應抗體或抗原結合

，

然后加酶

標記的抗原或抗體，再加底物顯色，最后根據色澤深淺來推算待測

抗

原或抗體的

含量。此方法特異性高，有效測定范圍可達到

20500 

ng/ml

，且酶免

疫法有標記

的試劑比較穩定并且無放射線危害等優點。

我們采用對已知抗體濃度的樣品進行

E

LISA

的

定量檢測，通過對其數據的分

析來驗證

ELISA

法最乙肝表面抗原定量

檢

測的準確性和可靠性，以衡量其實用性。

1 

材料

與

方法

1.1 

材料

1.1.1 

試

劑盒

乙肝表面抗原

ELISA

法定量分析試劑盒，福州藍

圖

生物工程有限公司出品。

1.1.2 

儀

器及

酶

標板

酶標儀：

Bio-Rad

680

；洗板機：

Bio-Rad

1575

；超純水系統：

Millipore

Elix

；電熱恒溫培養箱

(

DNP-9052):

上海精宏實驗設備有

限

公司。

1.1.3 

溶

液配

制

⑴

0.01M

pH7.4

的

PBS 

緩沖液：

稱取

8g NaCl

、

0.2g KCl

、

1.44g Na2HPO4

和

0.24g

 KH2PO4, 

溶于

800ml 

蒸

餾水中，用

HCl

調

節

溶液的

pH

值至

7.4

，

最

后加蒸餾水定容至

1L

即

可。